1、miRNA，siRNA，shRNA的区别在于：miRNA的主要功能是下调基因的表达；siRNA其主要在RNAi通路中起作用，干扰特异基因的表达；shRNA常被用于RNA干扰沉默靶基因的表达。
2、敲低。在实验室常用的基因敲低技术有三种，分别是shRNA，siRNA和CRISPR/Cas系统，因此sh是敲低技术，而且shRNA序列对HeLa细胞生长的抑制作用与其敲低效果成正相关。
3、使用嘌呤酶素选择 shRNA 或 shRNA 慢病毒颗粒是一种达到稳定基因沉默的方法。因此，如果一个靶基因的蛋白转换较慢，shRNA 质粒或 shRNA 慢病毒颗粒应该是达到同样效果的理想选择。
1、TTTTTG则是保证了shRNA转录出来后，其末端是连续的4个U，即UUUU。蓝色与红色部分的黑色字母标注的部分则是与FLCN的CDS互补的序列。
2、A13：根据实验需要沉默的时间来确定是用shRNA还是siRNA，1周以内的短期抑制，采用siRNA较好，无需构建载体，节省时间，还可以采用2次转染的方法，延长RNAi作用的时间到2周。
3、miRNA，siRNA，shRNA的区别在于：miRNA的主要功能是下调基因的表达；siRNA其主要在RNAi通路中起作用，干扰特异基因的表达；shRNA常被用于RNA干扰沉默靶基因的表达。
4、A4：单就siRNA和shRNA干扰效率而言，没有区别；但是你要考虑到转染效率的问题；因为最终的效果=干扰效率*转染效率*各种操作造成的衰减。换种说法，shRNA可以用来筛选，可以保证100%细胞都是KD的，因此positive的结果会更明显。
5、siRNA是双链RNA，其中一条链与靶基因的mRNA序列互补。将此双链RNA转染至细胞 能够沉默靶基因的表达 shRNA质粒 转染进细胞能够表达shRNA（发卡结构） 和双链RNA差不多 只不过是发卡结构。发卡的一条臂与靶基因mRNA互补。
1、质粒过表达转进去效率能维持48h。做最长的大概是转染后48h传代24后收蛋白72h都很少一般48h，根据经验不超过7天，维持一定量，要记得质粒是不能在真核复制的而且还会降解随着细胞分别质粒会慢慢消解。
2、首先需要针对目的基因设计高效的siRNA干扰片段。一般设计3-5条siRNA，然后对目的细胞进行转染，转染后24~72 h进行表达量检测，最佳检测时间与细胞类型、转染试剂、 检测 目的等相关。
3、对转染siRNA，在核酸水平，转染后8-48小时，即可观察到mRNA水平的逐步下降，一般来说，转染后48小时进行qRT-PCR检测通常会得到漂亮的结果。
4、将shrna构建到plko.1的质粒中，将质粒转染进细胞，在细胞质中，质粒就是转录出一段与目的基因互补的单链rna。
5、在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂，例如在绵羊成纤维细胞转染过程中FuGene HD的转染效率更高，GenEscortTM I对小鼠胶质细胞则具有更好的转染效果。总之，可以遵循高效、低毒等原则进行选择。
6、实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒，转染细胞没问题。我觉得只要是注意以下2点就可以了：1，注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染，收集菌体沉淀时防止菌液散落，经常用75%的乙醇擦拭手套。
